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高效毛细管电泳法测定注射用头孢他啶的含量似的

发布时间:2021-07-14 06:01:04 阅读: 来源:塑料模厂家

高效毛细管电泳法测定注射用头孢他啶的含量

[摘要]目的用HPCE测定注射用头孢他啶的含量。方法高效毛细管电泳法,有效毛细管长度60cm×内径75μm;硼砂缓冲液25mmol/L (pH8.2),高压进样也就是断点比例设置页面5s,分离电压20KV,温度为25℃,检测波长为254nm,头孢曲松为内标。结果头孢他啶在4~20μg/ml 浓度范围内线性关系良好(r=0.999 7),平均回收率为98.96%(n=5,RSD =1.74%)。结论本法简单、快捷、灵敏。

[关键词]头孢他啶;高效毛细管电泳法

头孢他啶属第三代头孢类抗生素,具有抗菌谱广、抗菌作用强的特点。对多种β-内酰胺酶有抵抗力,临床广泛应用于各种单纯及混合感染。目前测定头孢他啶含量较成熟的方法有HPLC法。高效毛细管电泳(HPCE)是近年来发展迅速的一种新的分离分析技术。与传统的分离分析手段相比较,具有高效、快速、微量和易于自动化等优势。HPCE分析抗生素的研究正引起人们的关注。高效毛细管电泳测定头孢他啶的含量国内未见报道。本文建立了用HPCE法测1般的有滚珠丝杠定头孢他啶含量的方法,此方法采用内标法测定简便灵敏、结果可靠,重现性好,能满足头孢他啶的药品质量监控。

1 仪器与试药

高效毛细管电泳仪,石英毛细管柱(60cm×75/μm)(均为美国Waters公司产品);Milennimn32数据处理系统;头孢他啶标准品(中国药品生物制品检定所);头孢曲松标准品(中国药品生物制品检定所);注射用头孢他啶(广州白云山制药股份有限公司,批号030407、030414、030509、030520、030605);硼砂、氢氧化钠均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 缓冲液的配制 精密称取4.78g硼砂溶于500ml水中,配成25mmol/L 硼砂电泳缓冲液溶液,磷酸调DH为8.2。

2.2 电泳操作条件分离电压:20KV;检测波长:254nm;进样量:50kPa×5s;缓冲液:25mmol/L 硼砂溶液(pH8.2)。每次进样前用缓冲液冲洗毛细管柱10rain,每次分析后用0.1mol/L 的氢氧化钠溶液冲洗2min,水冲洗10min。所用拉力实验机在使用进程中溶液均经0.45μm滤膜滤过。上述电泳条件,得电泳图。

2.3 标准品溶液和内标溶液的配制 精密称取头孢他啶标准品10.0mg,置于100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,配成0.1mg/ml 的头孢他啶标准品溶液。精密称取头孢曲松标准品20.0rng置于100ml量瓶中,加水至刻度,摇匀。吸取上述溶液5ml置25ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,配成头孢曲松40μg·/ml 的内标溶液。

2.4 线性关系考察 精密吸取头孢他啶标准品溶液2、4、6、8、l0ml置于50ml量瓶中,分别加内标溶液5ml,用水稀释至刻度,摇匀,按上述电泳条件,分别进样5s,以标准品浓度(μg/ml )为横坐标(C),头孢他啶主峰面积与内标峰面积比为纵坐标(A)作图,回归方程为:A=0.248 C 一0.078,r =0.999 7,n =5头孢他啶在4~20μg/ml 浓度范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取头孢他啶标准品溶液2ml和内标溶液5ml置于50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。按上述电泳条件,重复进样5次,测得头孢他啶峰面积的RSD为1由于我们将出售利润率较低的业务.82% ,表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 将同一标准品溶液在相同电泳条件下,分别于0、1、2、3、4h重复进样5次,测得头孢他啶峰面积的RSD为1.89% ,表明头孢他啶在4h内测定结果稳定。

2.7 重复性试验 按样品测定项下方法,对同一批号样品,分别2、夹具的使用向高效力、低劳动强度的方向发展取样平行测定5次,求得含量的相对标准偏差RSD为2.01% ,表明重复性较好。

2.8 加样回收率试验 按照2.4项的方法配制10、20、30μg·ml 三个已知浓度的样品与内标的混合溶液,加入头孢他啶标准品溶液进湖南工业大学承办行测定,以头孢他啶峰面积与内标峰面积比代入回归方程计算回收率。

2.9 样品测定 取注射用头孢他啶5批,精密称取适量置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。精密吸取该溶液lml置于25ml量瓶中,加入内标溶液2ml,用超纯水稀释至刻度,摇匀。进样,内标法计算5批样品的含量并与I-IPLC法测定的结果相比较,结果表明两种方法测定的结果之间无显著性差异。

3 讨论

3.1 由于头孢他啶溶液呈酸性,宜选用碱性缓冲液。本实验在对不同缓冲液进行的实验中,发现硼砂对头孢他啶的分离最理想。研究表明缓冲液浓度和pH值对分离具有重要影响。高浓度缓冲液可获得较好的分离,但保留时间会变长,而且,导致通过毛细管的电流增加,从而增大焦耳热。因此,我们选用25mmol/L 硼砂作缓冲液。pH值选择是决定分离成败的关键。采用pH8.2的硼砂缓冲液时分析时间短,峰形尖锐、对称并达到基线分离。

3.2 研究表明,柱温降低分离度变好,但柱效降低,分析时间变长。综合考虑分离度和迁移行为的变化,本实验选用25℃柱温较合适。分离电压是毛细管电泳的一项重要参数,实验表明,增加组分的迁移速度是减少谱带展宽、提高分离效率的重要途径,增加电场强度可以达到提高速度的目的。但高场强度导致通过毛细管的电流增加,从而增大焦耳热。在20KV时,分离选择性最佳。

3.3 由于吡啶是头孢他啶合成过程的原敷料,又是降解过程中的降解产物,对人体有一定的毒副作用。因此,在测定中一定要注意低温和避光保存,以防其分解。

3.4 本实验对HPLC和HPCE的测定结果进行了比较,两种方法测定的结果无显著性差异。HPLC法与HPCE法相比,具有消耗成本高、分析时间长、有机溶剂用量大等缺点。我们利用高效毛细管电泳法测定头孢他啶的含量,方法简便、准确、快速、重复性好,可为头孢他啶的质量控制提供一种简便的方法。

参考文献:

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